Depuis 1986, la Commission européenne de Pharmacopée (« la Commission ») et ses experts ont travaillé sans relâche à rendre possible l’application du principe des 3R (Replacement, Reduction, Refinement, en référence à la substitution, la réduction et l’amélioration de l’utilisation des animaux à des fins expérimentales) lors de la révision ou de la rédaction des textes publiés dans la Pharmacopée Européenne (Ph. Eur.). Grâce aux efforts de la Commission, aucune monographie de la Ph. Eur. portant sur les dérivés du sang et du plasma humains ne décrit d’essais sur animaux. En ce qui concerne les vaccins à usage humain et vétérinaire, une méthode in vitro a, dans la plupart des cas, été introduite en tant qu’alternative ou substitution à des essais in vivo.

Différentes stratégies sont, par ailleurs, appliquées pour encourager la réduction et l’amélioration des essais in vivo, comme l’utilisation de titrages sérologiques ou de titrages à une seule dilution dans le cas des vaccins diphtérique, tétanique, coquelucheux acellulaire et rabique (pour usage humain ou vétérinaire).

Vous trouverez ci-dessous les grandes étapes franchies ces dernières années.

Ces décisions sont pleinement conformes à la mission de l’EDQM de promouvoir et de protéger la santé humaine et animale, et à son engagement à respecter le principe des 3R.

Faites part de vos propositions de remplacement de méthodes in vivo

La Commission vous invite à communiquer au Secrétariat de la Commission (via le Helpdesk) toute nouvelle donnée en faveur du remplacement des méthodes in vivo restantes et toute proposition de méthode de substitution.

Historique de l’application des 3R à la Commission européenne de Pharmacopée depuis 2012

2024

Lors de sa 179e session (juin 2024), l’EPC a fait ses adieux à l’essai des pyrogènes sur lapin en l’éliminant des monographies de la Ph. Eur. En effet, pour conclure le vaste exercice mené dans l’objectif de supprimer totalement ledit essai de la Ph. Eur., l’EPC a adopté 57 textes révisés en ce sens et un nouveau chapitre général intitulé Pyrogénicité (5.1.13), marquant ainsi la fin du recours à l’essai des pyrogènes sur lapin dans la Ph. Eur. La liste des textes en question est disponible ici. Il s’agit d’un grand pas en avant pour le bien-être animal et pour le développement d’approches modernes de contrôle de la pyrogénicité in vitro. Par conséquent, l’utilisation de l’essai des pyrogènes sur lapin ne sera plus prescrite par aucun texte de la Ph. Eur. et il reviendra aux développeurs de médicaments d’opter pour un essai in vitro adapté (l’essai d’activation des monocytes, par exemple) pour contrôler la pyrogénicité de leur produit, sur la base d’une évaluation du risque, comme décrit dans le nouveau chapitre général.

Lors de sa 178e session (mars 2024), l’EPC a adopté deux nouveaux textes : une monographie générale – Médicaments de thérapie génique pour usage humain (3186) – et un chapitre général – Informations complémentaires sur les médicaments de thérapie génique pour usage humain (5.34). Ceux-ci mentionnent l’essai des endotoxines bactériennes par la méthode du facteur C recombinant comme alternative à l’essai recourant au lysat d’amœbocyte de limule, produit à partir du sang de cet animal. Ces deux textes remplacent le chapitre général Médicaments de transfert génétique pour usage humain (5.14), supprimé de la Ph. Eur. depuis le Supplément 11.7.

2023

Lors de sa 177e session (novembre 2023), l’EPC a décidé de s’engager sur une voie devant aboutir à la suppression des chapitres généraux Histamine (2.6.10) et Substances hypotensives (2.6.11) de la Ph. Eur. Ces deux textes décrivent des essais réalisés pour mesurer l’effet de l’histamine et de substances analogues, respectivement sur des cobayes et sur des chats. Quatre monographies contiennent une section Production renvoyant au chapitre général Histamine (2.6.10). Le chapitre général Substances hypotensives (2.6.11), quant à lui, est indépendant. En outre, la section Production de dix autres monographies décrit des exigences – des procédés de fabrication visant à éliminer ou à limiter autant que possible les substances hypotensives – qui sont en fait des vestiges de ces essais, même si elle ne renvoie pas explicitement aux chapitres en question.

Pour atteindre son objectif, l’EPC a approuvé une stratégie visant à supprimer de la Ph. Eur. ces deux chapitres généraux, ainsi que les mentions connexes dans la section Production des dix monographies susmentionnées. Cette stratégie a été exposée dans un article paru en mars 2024 dans Pharmeuropa Bio & Scientific Notes. L’exercice devrait être mené à son terme pour la publication de la 12e Édition de la Ph. Eur.

Lors de sa 176e session en juin 2023, l’EPC a adopté le nouveau chapitre général Essai d’activation des monocytes (MAT) pour les vaccins contenant des composés intrinsèquement pyrogènes (2.6.40), qui couvre le recours au MAT pour surveiller la reproductibilité de la production des vaccins intrinsèquement pyrogènes et qui sera d’une grande aide aux parties intéressées souhaitant mettre le MAT en œuvre pour ces vaccins.

Lors de la même session, l’EPC a également adopté une nouvelle version du chapitre général Essai d’activation des monocytes (2.6.30), révisé pour rationaliser l’essai et le mettre en phase avec les pratiques actuelles. Cette révision technique fait partie intégrante d’un exercice plus global de suppression de l’essai des pyrogènes sur lapin (décrit dans le chapitre général 2.6.8. Pyrogènes) de la Ph. Eur., dont elle constitue la toute première étape (voir ci-après la Stratégie visant à complètement remplacer l’essai des pyrogènes chez le lapin dans la Ph. Eur. à partir de 2022).

Plusieurs des textes adoptés lors de la 175e session de la Commission européenne de Pharmacopée (EPC) en mars 2023 ont été révisés en accord avec le principe des 3R.

Révision de plusieurs monographies de vaccins vétérinaires

Les monographies suivantes ont été révisées pour supprimer l’essai in vivo du virus vivant résiduel au stade du produit final (lorsqu’il n’y a pas de retour à la virulence) et lui privilégier l’essai en cours de fabrication, effectué de préférence sur des cultures cellulaires ; tous les essais du virus vivant résiduel restants sont effectués in vitro :

  • Vaccin inactivé de la grippe équine (0249),
  • Vaccin inactivé de la maladie d’Aujeszky pour le porc (0744),
  • Vaccin inactivé de la pseudopeste aviaire (maladie de Newcastle) (0870),
  • Vaccin inactivé de la bronchite infectieuse aviaire (0959),
  • Vaccin inactivé de la bursite infectieuse aviaire (0960),
  • Vaccin inactivé de la grippe porcine (0963),
  • Vaccin inactivé de la maladie des œufs hardés (1202),
  • Vaccin inactivé du paramyxovirus aviaire 3 pour la dinde (1392),
  • Vaccin inactivé de la maladie hémorragique du lapin (2325).

Les monographies suivantes ont été révisées pour réduire le nombre de contrôles effectués in vivo en routine dans le cadre des essais d’activité du lot :

  • Vaccin inactivé de la pseudopeste aviaire (maladie de Newcastle) (0870),
  • Vaccin inactivé de la bronchite infectieuse aviaire (0959),
  • Vaccin inactivé de la bursite infectieuse aviaire (0960),
  • Vaccin inactivé de la maladie des œufs hardés (1202),
  • Vaccin inactivé de Mycoplasma gallisepticum (1942),
  • Vaccin inactivé du choléra aviaire (1945),
  • Vaccin inactivé de la salmonellose à Salmonella Enteritidis pour le poulet (1947),
  • Vaccin inactivé de la salmonellose à Salmonella Typhimurium pour le poulet (2361).

Les monographies suivantes ont été révisées pour ajouter des points limites précoces (pouvoir immunogène) :

  • Vaccin vivant de l’encéphalomyélite infectieuse aviaire (0588),
  • Vaccin inactivé du choléra aviaire (1945),
  • Vaccin inactivé de la maladie hémorragique du lapin (2325).

2022

En juin 2021, la Commission européenne de Pharmacopée a décidé de complètement remplacer l’essai des pyrogènes sur lapin dans la Ph. Eur. sur une période de cinq ans environ. Le document de stratégie relatif à la pyrogénicitépublié en septembre 2022 dans la rubrique « Informations techniques » de Pharmeuropa fournit de plus amples informations sur la manière dont ce remplacement sera effectué.

Révision de la monographie du vaccin rabique pour exclure l’essai du NIH des essais de routine

Lors de sa 172e session (mars 2022), la Commission européenne de Pharmacopée a adopté la monographie révisée Vaccin rabique inactivé pour usage vétérinaire (0451). Le texte révisé réserve l’essai du NIH aux seules fins du développement et de la qualification des étalons/préparations de référence ; il ne pleut plus servir d’essai de routine pour le titrage d’activité des lots.

Révision des monographies de vaccins vétérinaires en vue de supprimer l’essai in vivo du virus vivant résiduel au stade du produit final

La monographie Vaccin rabique inactivé pour usage vétérinaire (0451) a été la première à être révisée pour supprimer l’essai in vivo du virus vivant résiduel au stade du produit final et lui substituer l’essai en cours de fabrication effectué, de préférence, sur des cultures cellulaires, étant donné l’absence de réversion à la virulence. Si un essai du virus vivant résiduel doit tout de même être effectué, il devra être réalisé in vitro.

Révision de la monographie Vaccin botulinique pour usage vétérinaire (0360)

Suite à l’adoption de la monographie révisée Toxine botulinique type A pour préparation injectable (2113), une section consacrée à l’application de points limites précoces lors du dosage de la DL50 a également été introduite dans la monographie du vaccin, pour réduire les souffrances animales. À cette occasion, il a également été précisé que le dosage sur cellules constitue une alternative in vivo validée satisfaisante à l’essai d’activité du lot effectué en routine.

Révision de la monographie Préparation radiopharmaceutique (0125)

La section relative à la réalisation de l’essai de distribution physiologique a été supprimée.

2021

Plusieurs des textes adoptés lors de la 170e session de la Commission européenne de Pharmacopée en juin 2021 ont été révisés en accord avec le principe des 3R.  

Révision des exigences relatives aux essais de toxicité des vaccins diphtériques

Ces monographies ont été révisées pour supprimer l’essai de toxicité spécifique (essai sur cobaye) qui est effectué sur le lot final dans le cadre de la validation du procédé de fabrication.

Faisant suite à de récents exercices similaires concernant d’autres vaccins anatoxiniques, la décision de supprimer cet essai a été prise au terme d’une réévaluation approfondie des exigences relatives aux essais de toxicité des vaccins diphtériques.

 

Révision de plusieurs monographies de vaccins vétérinaires

Trois monographies de vaccins à clostridies pour usage vétérinaire ont également été révisées, soumises à la Commission et adoptées :

  • Vaccin de Clostridium septicum pour usage vétérinaire (0364),
  • Vaccin de Clostridium perfringens pour usage vétérinaire (0363), et
  • Vaccin de Clostridium novyi (type B) pour usage vétérinaire (0362).

Les révisions visaient à :

  • remplacer l’utilisation des souris comme indicateur de toxicité par une méthode in vitro appropriée — essai de la dose létale minimale (DLM) et titrage du pouvoir de combinaison (TCP, pour Total Combining Power) — lors des essais de contrôle de la qualité en cours de fabrication, qui traditionnellement utilisent de nombreux animaux ;
  • favoriser l’utilisation de méthodes in vitro pour le titrage d’activité des lots effectué en routine (plusieurs méthodes in vitro sont disponibles) ;
  • autoriser les fabricants à remplacer les essais d’identification des vaccins réalisés sur des animaux par des essais in vitro ;
  • supprimer l’essai de toxicité résiduelle sur le produit final, car il n’a jamais été fait état d’une réversion de la toxicité, et par souci de cohérence avec la monographie générale Vaccins pour usage vétérinaire (0062) ; les conditions dans lesquelles l’essai de toxicité résiduelle peut être omis sur le vrac final et le lot final sont indiquées.

 

Révision d’une monographie de produit radiopharmaceutique

La monographie Suspension injectable de macrosalb-technétium (99mTc) (0296) a été révisée pour transférer l’essai (in vivo) de distribution physiologique de la section Essais vers la section Production, car l’essai (in vitro) de la taille des particules est également considéré comme un indicateur de la reproductibilité de la production et donc de la distribution physiologique. Suite à la modification du texte adoptée par la Commission, l’essai de distribution physiologique ne sera plus à effectuer en routine et le nombre d’animaux utilisés pour les essais sera ainsi considérablement réduit.

Révision de la monographie Toxine botulinique type A L’engagement à respecter le principe des 3R s’est poursuivi avec une monographie révisée de la toxine botulique type A, également adoptée lors de la session. Le texte modifié fournit des informations actualisées sur les méthodes in vitro alternatives applicables au titrage d’activité et comprend désormais une section relative à l’application de points limites précoces dans le dosage de la DL50 afin de réduire la souffrance des animaux.

 

2020

Des monographies de vaccins vétérinaires révisées dans le but de promouvoir le principe des 3R

Lors de sa 167e session (juin 2020), la Commission européenne de Pharmacopée a adopté la version révisée de trois monographies de vaccins pour usage vétérinaire, modifiées dans l’objectif de promouvoir le principe des 3R :

  • Vaccin vivant de la parvovirose canine (0964) afin de réduire le nombre de chiens utilisés pour les essais d’innocuité ;
  • Vaccin inactivé de l’herpèsvirus équin (1613) afin de souligner le fait qu’il convient de privilégier une méthode alternative in vitro pour l’essai d’activité du lot de routine ;
  • Vaccin vivant de la bronchite infectieuse aviaire (0442) afin d’encourager le développement de méthodes alternatives, comme la PCR, pour réisoler le virus à partir de prélèvements trachéaux.

 

2019

Examen des exigences relatives à la toxicité des vaccins tétaniques

En novembre 2019, lors de sa 165e session, la Commission européenne de Pharmacopée a adopté une version révisée de ses monographies de vaccins tétaniques, dont ont été supprimés trois essais sur animaux  (tous pratiqués sur des cobayes). L’essai de toxicité spécifique et l’essai de toxicité résiduelle, respectivement applicables aux vaccins à usage humain et aux vaccins à usage vétérinaire et effectués sur le lot final dans les deux cas, et l’essai d’irréversibilité de l’anatoxine tétanique, effectué sur le vrai final d’anatoxine purifiée, ont été supprimés.

La décision relative à la suppression de ces essais a été prise à la suite d’un réexamen des exigences de toxicité applicables à ces vaccins.

 

2018

Remplacement de l’essai de sensibilisation à l’histamine (essai « HIST ») pour détecter la toxine coquelucheuse résiduelle

Lors de sa 162e session (novembre 2018), la Commission européenne de Pharmacopée a adopté le remplacement de l’essai murin de sensibilisation à l’histamine (essai « HIST ») par un dosage standardisé basé sur l’effet d’agrégation des cellules CHO pour contrôler l’absence de toxine coquelucheuse résiduelle. Ce remplacement concerne le chapitre général 2.6.33 Toxine coquelucheuse résiduelle et les dix monographies spécifiques de vaccins coquelucheux acellulaires.

Dans ce même exercice de révision, l’essai d’irréversibilité de l’anatoxine coquelucheuse et l’exigence d’une recherche de toxine coquelucheuse résiduelle sur le lot final ont été supprimés des monographies spécifiques de vaccins coquelucheux acellulaires.

 

2017

Suppression de l’essai de toxicité anormale dans la Pharmacopée Européenne

En novembre 2017, lors de sa 159e session, la Commission a adopté 49 monographies (dont 36 concernant des vaccins pour usage humain) révisées pour supprimer la référence à l’essai de toxicité anormale. Il ne sera donc plus fait mention du chapitre général Toxicité anormale (2.6.9) dans aucune monographie et le chapitre sera supprimé. En conséquence, l’essai de toxicité anormale sera complètement supprimé de la Ph. Eur. à compter du Supplément 9.6 (date de mise en application : 1er janvier 2019).

 

2016

Nouveau chapitre de la Ph. Eur. : Substitution de méthode(s) in vitro aux méthodes in vivo pour le contrôle de la qualité des vaccins (5.2.14)

Toujours pour encourager la substitution de méthodes in vitro aux méthodes in vivo, les groupes d’experts de la Ph. Eur. travaillant sur les vaccins ont élaboré un nouveau chapitre général, intitulé Substitution de méthode(s) in vitro aux méthodes in vivo pour le contrôle de la qualité des vaccins (5.2.14). Adopté pendant la 156e session de la Commission, ce texte donne des orientations en matière de validation de nouvelles méthodes, lorsque la comparaison directe avec une méthode in vivo existante n’est pas réalisable.

 

Révision de l’Essai d’activation des monocytes (2.6.30) : une alternative à l’essai des pyrogènes

Fortement remaniée afin de tenir compte des commentaires de représentants de l’industrie, d’universitaires, des autorités de réglementation et des laboratoires officiels de contrôle des médicaments (OMCL), la révision du chapitre général Essai d’activation des monocytes (2.6.30) a été adoptée par la Commission pendant sa 155e session. La révision de ce chapitre (dont la première publication dans la Ph. Eur. date de 2010) visait à encourager l’utilisation de cet essai par les utilisateurs, plus particulièrement en remplacement de l’essai des pyrogènes qui nécessite le recours à des animaux de laboratoire.

 

2015

Révision de la stratégie de contrôle des agents étrangers

En novembre 2015, la Commission s’est intéressée aux exigences en vigueur concernant la recherche d’agents étrangers, dans l’objectif de les rationaliser sans compromettre les garanties de sécurité existantes. À cette fin, un renvoi au nouveau chapitre général 5.2.13, qui établit des exigences de qualité relatives aux élevages sains de poulets utilisés pour la production de vaccins inactivés pour usage vétérinaire, a été introduit dans huit monographies de vaccins vétérinaires, rendant obsolète l’essai des agents étrangers effectué sur le produit final. Dans ce même cadre, les textes révisés Essai des agents étrangers dans les vaccins viraux pour usage humain (2.6.16) et Substrats cellulaires utilisés pour la production de vaccins pour usage humain (5.2.3) ont été adoptés pendant la 156e session de la Commission. Les modifications apportées incluaient la suppression des essais sur souris adultes et sur cobayes, et la restriction des essais sur souriceaux et sur œufs embryonnés aux cas où ils contribuent à réduire les risques.

 

Révision de la monographie générale Vaccins pour usage vétérinaire (0062) : réduction des essais sur animaux pour les vaccins vétérinaires

Lors de sa 153e session (novembre 2015), la Commission a adopté une révision de la monographie générale Vaccins pour usage vétérinaire (0062), parallèlement à une quarantaine de monographies de vaccins vétérinaires, afin d’autoriser les fabricants à remplacer les essais d’identification des vaccins réalisés sur des animaux par des essais in vitro, quand il y a lieu. Outre la suppression de la référence à l’essai d’induction de la production d’anticorps pour l’identification de tous les vaccins inactivés, l’essai d’inactivation pour tous les vaccins vétérinaires inactivés a été révisé, permettant ainsi l’omission du deuxième essai d’inactivation.

 

Introduction de nouveaux systèmes pour le contrôle de la reproductibilité de la production et de solutions de substitution in vitro

L’engagement de la Ph. Eur. envers le principe des 3R s’est poursuivi avec l’introduction de dispositions relatives à de nouveaux systèmes de contrôle de la reproductibilité de la production, dans les Prescriptions générales dans un premier temps (146e session de la Commission), puis dans la monographie générale Vaccins pour usage vétérinaire (0062) et dans trois monographies spécifiques : Vaccin inactivé de la leptospirose canine (0447), Vaccin inactivé de la leptospirose bovine (1939) et Vaccin inactivé de la rhinotrachéite infectieuse bovine (2674) (153e session). Survenue parallèlement à la mise en application de la Directive 2010/63/UE relative à la protection des animaux utilisés à des fins scientifiques (révisée), cette modification prend également en compte les efforts d’élaboration de nouvelles méthodes d’essai déployés par les fabricants et les encourage à mettre au point des méthodes in vitro. Elle traduit également l’amélioration du contrôle de la production de vaccins dans son ensemble.

 

2014

Méthode de substitution ELISA introduite dans le Titrage de l’activité du vaccin de l’hépatite A (2.7.14)

En juin 2014, lors de sa 149e session, la Commission a introduit un titrage ELISA validé pour la détermination de la teneur en antigène dans le chapitre Titrage de l’activité du vaccin de l’hépatite A (2.7.14), offrant ainsi une alternative au titrage sérologique chez la souris.

 

2012

Réduction de l’utilisation superflue d’animaux pour les vaccins coquelucheux

En juin 2012, du fait de l’adoption du chapitre général Absence de toxine coquelucheuse résiduelle et irréversibilité de l’anatoxine coquelucheuse (2.6.33), neuf monographies de vaccins pour usage humain révisées pour introduire une référence à ce nouveau chapitre ont été adoptées. Le protocole décrit dans ce chapitre, fondé sur les résultats d’une étude menée dans le cadre du Programme de standardisation biologique (BSP), a facilité la standardisation de la méthode et réduit l’utilisation superflue d’animaux.

 

Adoption de 80 monographies de vaccins vétérinaires pour réduire le nombre d’animaux utilisés lors des essais

Au cours de sa 142e session (avril 2012) et après plusieurs années d’un programme de travail vaste et ambitieux lancé dans le cadre de l’harmonisation avec les Guidelines 41 et 44 du VICH (Veterinary International Conference on Harmonization), la Commission a adopté quelque 80 monographies de vaccins vétérinaires, ainsi que la monographie générale Vaccins pour usage vétérinaire et deux chapitres généraux (5.2.6 et 5.2.9), révisés pour assurer une meilleure cohérence avec la réglementation européenne.

Le programme de travail incluait également des monographies de vaccins destinés à des espèces hors champ d’application des guidelines VICH, dans un souci d’harmonisation des essais d’accroissement de la virulence réalisés au cours du développement des vaccins, afin de réduire significativement le nombre d’animaux utilisés à des fins expérimentales.

Pendant cette session, la Commission a également voté en faveur de la suppression, pour tous les vaccins vétérinaires visés par la Ph. Eur., de la dérogation relative aux essais d’innocuité effectués sur chaque lot chez l’animal cible (TABST, pour « Target Animal Batch Safety Tests »), option qui était disponible depuis 2004 pour les vaccins bien établis.